W pełni automatyczna maszyna do ekstrakcji i wykrywania kwasów nukleinowych firmy New Tech

Pięć sił:
● Przyrząd skonfigurowany z etapem ekstrakcji i oczyszczania kwasów nukleinowych
● Przyrząd skonfigurowany z modułem ekstrakcji ultradźwiękowej
● Przyrząd skonfigurowany z pełną automatyką
● Przyrząd skonfigurowany ze zmiennym wzmocnieniem temperaturowym
● Urządzenie skonfigurowane z całkowicie zamkniętym zestawem odczynników

1. Czy odczynniki do wykrywania kwasów nukleinowych wymagają ekstrakcji i oczyszczania?
Zasada detekcji kwasu nukleinowego jest następująca: pod wpływem startera polimeraza DNA zostaje wykorzystana do przeprowadzenia amplifikacji w reakcji łańcuchowej na matrycy DNA/RNA (wymagającej odwrotnej transkrypcji NA), a następnie wykrywana jest ilość uwolnionego sygnału fluorescencyjnego w celu określenia czy próbka zawiera kwas nukleinowy (DNA/RNA) wykrywanego patogenu.

1) Próbki, które nie zostały wyekstrahowane lub oczyszczone, mogą zawierać wiele składników mających wpływ na wynik końcowy: nukleazę (która może rozpuścić docelowy kwas nukleinowy i spowodować fałszywie ujemne), proteazę (która może redukować polimerazę DNA i powodować fałszywie ujemne), metale ciężkie sól (co prowadzi do inaktywacji syntazy i powoduje fałszywie dodatni wynik), zbyt kwaśne lub zbyt zasadowe pH (co może spowodować niepowodzenie reakcji), Niekompletny RNA (prowadzący do fałszywie ujemnego niepowodzenia odwrotnej transkrypcji).

2) Niektóre próbki są trudne do bezpośredniej amplifikacji: Gram-dodatnie i niektóre pasożyty, ze względu na grube ściany komórkowe i inne struktury, jeśli nie przejdą procesu ekstrakcji i oczyszczania kwasu nukleinowego, zestaw bez ekstrakcji może nie dać się próbki.

Dlatego zaleca się wybranie zestawu testowego lub instrumentu skonfigurowanego do etapu ekstrakcji kwasu nukleinowego.

2. Ekstrakcja chemiczna czy fizyczna ekstrakcja ultradźwiękowa?
Ogólnie rzecz biorąc, ekstrakcję chemiczną można zastosować w większości procesów obróbki wstępnej i oczyszczania.Jednakże w przypadku grubościennych bakterii Gram-dodatnich i niektórych pasożytów zdarza się również, że ekstrakcja chemiczna nie pozwala na uzyskanie skutecznych matryc kwasów nukleinowych, co skutkuje fałszywie ujemnym wykrywaniem.Ponadto w ekstrakcji chemicznej często wykorzystuje się silne środki, jeśli elucja nie jest dokładna, łatwo jest wprowadzić do układu reakcyjnego mocne zasady, co skutkuje niedokładnymi wynikami.

Fragmentacja ultradźwiękowa wykorzystuje kruszenie fizyczne, które zostało z powodzeniem zastosowane przez GeneXpert, wiodące przedsiębiorstwo w dziedzinie POCT do użytku u ludzi i ma absolutną przewagę w ekstrakcji kwasów nukleinowych z niektórych złożonych próbek (takich jak Mycobacterium tuberculosis).

Dlatego zaleca się wybranie zestawu testowego lub instrumentu skonfigurowanego do etapu ekstrakcji kwasu nukleinowego.i optymalnie jest, jeśli istnieje moduł ekstrakcji ultradźwiękowej.

3. Ręczny, półautomatyczny i w pełni automatyczny?
Jest to problem kosztów pracy i wydajności pracy.Obecnie w szpitalach dla zwierząt domowych brakuje personelu, a ekstrakcja i wykrywanie kwasów nukleinowych to praca wymagająca pewnych umiejętności i doświadczenia.Nie ma wątpliwości, że w pełni automatyczna maszyna do ekstrakcji i wykrywania kwasów nukleinowych to doskonały wybór.

4. Wzmocnienie przy stałej czy zmiennej temperaturze?
Reakcja amplifikacji jest ogniwem wykrywającym kwas nukleinowy, a profesjonalna technologia wykorzystywana w tym połączeniu jest złożona.Z grubsza mówiąc, do amplifikacji kwasu nukleinowego stosuje się enzymy.W procesie amplifikacji wykrywany jest wzmocniony sygnał fluorescencji lub osadzony sygnał fluorescencji.Ogólnie rzecz biorąc, im wcześniej pojawia się sygnał fluorescencji, tym większa jest zawartość docelowego genu w próbce.

Amplifikacja w stałej temperaturze jest amplifikacją kwasu nukleinowego w stałej temperaturze, podczas gdy amplifikacja w zmiennej temperaturze jest amplifikacją cykliczną ściśle zgodną z wydłużaniem przez denaturację-wygrzewanie.Przeprowadzono badanie czasu wzmacniania w stałej temperaturze, natomiast na czas wzmacniania w temperaturze zmiennej duży wpływ ma szybkość wzrostu i spadku temperatury przyrządu (obecnie wielu producentów jest w stanie wykonać 40 cykli wzmacniania w ciągu około 30 minut).

Jeśli warunki laboratoryjne są dobre, a podział na strefy jest rygorystyczny, rozsądne jest stwierdzenie, że różnica w dokładności między nimi nie będzie duża.Jednakże amplifikacja w zmiennej temperaturze umożliwi syntezę większej liczby produktów kwasu nukleinowego w stosunkowo krótszym czasie.W przypadku laboratoriów bez ścisłego podziału na strefy i bez profesjonalnego przeszkolenia personelu ryzyko wycieku aerozolu kwasu nukleinowego będzie większe, a w przypadku wycieku pojawia się fałszywie pozytywny wynik, który jest niezwykle trudny do wyeliminowania.

Ponadto amplifikacja w stałej temperaturze jest również bardziej podatna na niespecyficzną amplifikację, gdy próbka jest złożona (względna temperatura reakcji jest niższa, a im wyższa temperatura wydłużania, tym lepsza specyficzność wiązania startera).

W obecnej technologii wzmocnienie przy zmiennej temperaturze jest bardziej niezawodne.

5. Jak uniknąć ryzyka wycieku produktów amplifikacji kwasów nukleinowych?
Obecnie wielu producentów wybiera probówkę do PCR typu gruczołowego jako rurkę reakcyjną kwasu nukleinowego, która jest uszczelniana przez tarcie, a denaturacja temperaturowa w denaturacji o zmiennej temperaturze w amplifikacji PCR o zmiennej temperaturze osiąga 90 stopni
Celsjusza.Powtarzający się proces rozszerzania się pod wpływem ciepła i kurczenia się pod wpływem zimna stanowi wielkie wyzwanie dla uszczelnienia probówki do PCR, a probówka do PCR typu dławnicowego stosunkowo łatwo powoduje wyciek.

Zaleca się prowadzenie reakcji w całkowicie szczelnym zestawie/probówce, aby uniknąć wycieku produktu reakcji.Byłoby idealnie, gdyby można było opracować w pełni szczelny zestaw do ekstrakcji i wykrywania kwasów nukleinowych.

Zatem nowa, w pełni automatyczna maszyna do ekstrakcji i wykrywania kwasów nukleinowych firmy New Tech oferuje pięć optymalnych możliwości do wyboru powyżej.